過去傳統的手術室多以白色、淺綠色、淺藍色、淺褐色等淡色系為主，但近年來設計師一反傳統，開始使用藍色、黃色、橘色等明亮的主色加以混合，得到不錯的評價，工作人員感到心情較輕鬆，工作的滿意度提高。
二、門
手術室的門應有兩扇，一為工作人員或無菌物品出入的側門，另一為接送病人或運送汙染物品的正門。主要的材質為玻璃窗，若該門須隔絕輻射時，其應為鉛玻璃。門的大小以５～６呎最適當，可方便病床及大型機器進出，最小不可小於４呎。
一般門的開啟方式有兩種：一為最常見的門樞型，其一邊各定於牆，另一邊則以弧型方式向內或向外開啟；另一種軌道型，其門的移動向坐右兩邊沿著軌道開啟，為平行移動，多見於自動門。在理論上，手術室的門應使用軌道型的自動門，因為前者開啟時，較會產生氣流，鼓動灰塵。有研究顯示，每當門樞型的門開啟，空氣中的菌落數目就會增加。然而選擇軌道型的門宜注意:門開啟時是以推入另一片門為佳，而非推入牆中，而且軌道的溝槽宜突起地面，較方便清潔。另外，手術室的門要隨時保持關閉，以維持手術室的清潔。
三、空調
手術室的空調需要具備高效率的溫度、溼度調節與空氣淨化三個條件，主要是由於空氣也是傳染病原體的媒介，手術室內的空氣含有微生物塵、皮屑及飛沫，可能與院內感染有關。又，麻醉機器會釋放出乙醚，為了防止麻醉產生之廢氣在手術室內囤積，手術室內的空氣需要經過過濾並隨時保持流通。此外，適當的溼度可維持空氣的導電性，可以防止發生電爆，故手術室的空氣品質將影響工作人員的舒適度、安全性，亦影響感染刺制的成效。手術室內最主要的保護對象為進行手術之病人及醫護人員，因此無菌與無塵的環境成為現代化醫院手術室所必需的條件，而潔淨度控制為手術室內重要課題。
- 空氣淨化
一般手術室空調採用中央補氣系統(MAKE-UP AIR UNITS: MAU) ，又稱『外氣空調箱』，提供處理後之外氣給各手術房，而各手術房設立獨立空氣循環系統，設定符合需要之溫度，以便提供冷卻、除溼、過濾、殺菌的功能。同時，各手術房之間沒有空氣混合，可以避免交叉感染的問題。一般手術房之循環空調箱，吊掛於手術室區的走道天花板內部，因此，天花板必需預留維修孔。由於手術台本身會對手術室內的氣流產生一定的影響，被視為最主要之控制區域。有學者建議在空氣過濾器的出口處四周加裝一導風簾，對於手術台上方之氣流有明顯的改善；而在無安裝導風簾的情況下，可將手術台的位置遠離回風口處，對於整個手術室的氣流即可改善。
空調之空氣過濾器的型式及過濾程度也會影響空氣的品質。目前多採用高效率空氣濾網(HIGH EFFICIENCY PARTICULATE AIR FILTER; HEPA FILTER)，可以過濾出0.3微米的顆粒。在德國甚至要求醫療用的無菌過濾網需要使用三層的HEPA網，如此可以阻隔99.997%的空氣中微粒。由於過濾網有一定的壽命，且需要經常清洗，當到了有效期限或濾網沾滿了灰塵或汙物時，即須更換才能維持滿意的效果。理想上，手術室最好維持100%的新鮮空氣，為此需要有每小時60次的新鮮空氣換氣率，但成本太高，目前多數國家要求至少要達每小時20次以上的換氣率才夠，如此才能淡化房間內任何特殊氣味及麻醉的廢氣。此外，手術室內之空調應為正壓系統，以防走廊灰塵、汙物滲入。
- 溼度及溫度
手術室內應維持適當的溼度，一般以60%為佳，而麻醉位置則為50%(其範圍在50~65%)，適當的濕度可維持空氣的導電性，將過多的靜電轉诶電流並傳到地板，而不至於引起氣爆。有有學者建議手術室所有工作區必須控制相對濕度在３０～６０％，特別是無菌物儲存處，太潮濕會增加汙染機會。手術室理想溫度應維持在２０～２４℃之範圍，此溫度讓人感到最舒服，但病人由於身體的曝露及體溫的流失，通常會感到涼意，須注意保暖。
手術室維持在此低溫及低濕環境下，最重要的是可降低細菌的增生。除此之外，溫度和濕度的控制，也會影響手術效果，如熱門的眼睛雷射矯視手術，除了空氣中的水分會影響雷射機器的效能外，濕度高亦會導致角膜膨脹，若沒有控制手術室的溫度和濕度，使雷射矯視手術出現誤差，病人可能需要第二次手術才能看到較好的效果。
四、牆、天花板、地板
所有手術室的表面，包括強、天花板、地板等都是需要平面光滑、堅硬、防水、防火、防塵、輻射防護、隔音、無縫且易於清洗。地板的要求除了上述規定外，還要可忍受消毒劑（如漂白水）得經常清洗，而不會產生影響（如無汙點或退化）。另外，地板疑有較佳的導電性材料，可驅散工作人員和設備因摩擦而產生的靜電，俗此可防止發生氣爆，及減少發生電休克的傷害。一般地板的材質可以使用柏油、乙烯樹脂、水磨石地板，許多較新的手術室採用墊式地板，以減少工作人員的疲倦感，但不能使塑膠性地才，其易因殺菌溶液而產生斑痕（麻點）。
牆壁間要有３ｍｍ的鉛屏障，且牆壁的採光需良好。另外，為了增加手術室地面的空間，強與天花板常被利用來裝置設備或儀器，例如：掛勾、麻醉裝置、電子顯微鏡、攝影機、Ｘ光透視一、氧氣、抽吸裝置及管子等，以減少地板的混亂。因此，天花板的空間必先規劃、設計好，且須配合工作人員的作業，以防止意外發生，如屋頂與天花板距離再６０～９０公分，可方便安裝各種錯綜複雜的管線。
五、管路與電路系統
如前所述，為了減少手術室地板的混亂，房間內的各種管路與電路系統，如真空、壓縮的氣體、氧氣、二氧化碳、麻醉氣體經由管子輸送進入手術室後，其出口可裝置在牆壁、天花板或懸吊在天花板。為了管路有問題即發出警告聲響，其牆壁崁燈會發亮，通常此刺耳的聲音能透過按壓牆上開關而被關掉，但不正常的崁燈會發亮，直到問題被解決為止。此外，麻醉機器會釋放乙醚，因乙醚比空氣種，會沉到地面，故地板上高度１．５公尺以下的電器物品裝有地線是必要的，須放在器械桌上，以減少電器接觸到乙醚而引發爆炸的危險性。
六、燈光
手術室的光線要能提供足夠的照明，其來源可分一般的室內燈與手術台的燈光（無影燈）。一般室內燈以崁裝在天花板上的分散裝置為考量，可防灰塵堆積，供手術前準備病人、手術後運送病人及清潔時使用。室內燈一般由天花板的日光燈或白熾燈提供，這些燈源必須使室內光線平均分布，又不會引起眼睛的刺激與疲勞，以利手術的進行，特別是精細、顯微的手術。
手術台使用的手術燈多懸吊於天花板，或為可移動的手術立燈。手術部位的照明取決為手術燈光的性質和手術部位組織的顏色，如淺色閃光的組織彼岸色的步伐光組織所需的燈光少，且燈光必須要能辨認組織的病理變化。。一般對手術燈的要求有：
1.必須與日光相近；2.為無影燈；3.距離下刀部位約４２吋；4.光線均勻且集中；5.照度約１０００～１００００呎燭光，不能有反光，亦不能產生過大的熱量，以便可清楚看到組織結構、減少組織的燒傷；6.邀容易清洗及防暴等功能。
另外，手術登上裝有把手，在手術過程中，依手術部位與傷口大小的不同，需要不同的燈光性質與焦距，即可藉由無菌的把手隨時調整不同的角度，以利手術的進行。所有手術室皆須設置緊急用燈光，手術燈需與自動發電機相連，當停電時，可快速來電，無發電設備則可用乾電池手術燈。
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